Induco CRISPR-Cas9 cải thiện độ chính xác của Genome chỉnh sửa trong gạo

Ngày cập nhật 30 Tháng Chín 2019

Biểu hiện trong thời gian của CRISPR/Cas9 là một phương pháp hiệu quả để hạn chế hoạt động của nó và cải thiện độ chính xác trong chỉnh sửa bộ gen. Ở đây, chúng tôi mô tả CRISPR/Cas9 sốc nhiệt trong việc chỉnh sửa bộ gen kiểm soát, chứng minh hiệu quả trong vụ mùa lúa. Sử dụng hệ thống khởi động Gene protein nhiệt đậu nành và promoter U3 của Rice để thể hiện Cas9 và sgRNA, tác giả đã phát triển “Heat ‐ Shock” (HS) ‐ CRISPR/Cas9 System, và thử nghiệm hiệu quả của nó trong gen đột biến mục tiêu. Hai loci đã được nhắm mục tiêu trong gạo, sự hiện diện của các đột biến được nhắm mục tiêu đã xác định trước và sau khi điều trị HS. Chỉ có một tỷ lệ thấp của gen đột biến được phát hiện trước khi HS (~ 16%), nhưng một tỷ lệ tăng của gen đột biến được quan sát thấy sau khi điều trị HS trong số các dòng biến đổi gen (50 – 63%). Phân tích các nhà máy tái sinh chứa chấp HS ‐ crispr/Cas9 tiết lộ rằng mutagenesis nhắm mục tiêu đã bị đàn áp trong các nhà máy nhưng gây ra bởi HS, được phát hiện bởi Sanger trình tự sau một vài tuần của HS phương pháp điều trị. Quan trọng nhất, những đột biến HS-do đã được truyền đến con cháu với tốc độ cao, tạo ra những đột biến đơn và lưỡng tính độc lập tách biệt khỏi gen Cas9 . Ngoài ra, đột biến off-target là không thể phát hiện hoặc được tìm thấy với tốc độ thấp hơn trong các dòng HS ‐ CRISPR/Cas9 so với các dòng CRISPR/Cas9 biểu hiện quá mức. Với nhau, công việc này cho thấy rằng HS ‐ CRISPR/Cas9 là một nền tảng được kiểm soát và hiệu quả hợp lý để chỉnh sửa bộ gen, và do đó, một công cụ đầy hứa hẹn để hạn chế các hiệu ứng mục tiêu trên bộ gen và cải thiện độ chính xác của bộ gen chỉnh sửa.